Флуоресцентный микроскоп nanoFLeye

nanoFLeye^TM – это надежный флуоресцентный микроскоп высокого разрешения, специально разработанный для исследования самых маленьких образцов. Он представляет собой микроскоп сверхвысокого разрешения, предназначенный для локализации одиночных молекул (SML) на основе SPDM метода микроскопии (спектральная прецизионная дистанционная микроскопия) с использованием до четырех различных лазеров возбуждения.

• Стандартная широкопольная флуоресцентная микроскопия, микроскопия TIRF и сверхвысокое разрешение на основе SPDM метода
• Трехмерное многоцветное изображение на основе SPDM метода
• Многоцветное изображение с использованием до четырех различных лазеров с доступными стандартными длинами волн на 405 нм, 488 нм, 532 нм, 561 нм и 647 нм и широким выбором объективов
• Возможность автоматизации высокого уровня, такой как автофокус, легко программируемые последовательности измерений и автоматический анализ данных
• Понятный и удобный интерфейс
• Передвижное устройство «Все в одном» с размерами: 100 (Ш) × 100 (Г) × 130 (В) см
• Возможность удаленного управления

• Белки-полимеры в образце клеточной культуры
• Тромбоциты человека
• Белки-полимеры в образце ткани
• Окрашенные клетки Cos-7

Обычная флуоресцентная микроскопия является универсальным инструментом для проведения анализа функциональной клеточной биологии. Флюорофоры связываются с антителами, которые связываются с соответствующими им белками в клетке. Анализируя сигналы флуоресценции на микроскопическом изображении, можно получить представление о распределении выбранных белков внутри клетки.

Однако с точки зрения нанонауки и детального понимания биологических процессов на молекулярном уровне традиционная флуоресцентная микроскопия «натянута» до предела.

В эпифлуоресцентном микроскопе латеральное разрешение определяется дифракционным пределом, т.е. вы не можете различить две молекулы, находящиеся на расстоянии менее ≈200 нм друг от друга. В конфокальной установке можно немного улучшить разрешение, но недостаточно для обнаружения одиночных молекул.

Именно здесь SPDM метод микроскопии раскрывает свои преимущества:

1. В обычной флуоресцентной микроскопии полная ширина на половине максимума (FWHM) функции рассеяния точки (PSF) > 200 нм. Сигналы соседних красителей перекрываются, поэтому отдельные молекулы не могут быть разрешены.
2. Используя SPDM метод, случайно активированные красители «оптически изолированы», т.е. не может происходить перекрытия сигнала соседних молекул.
3. Расположение оптически изолированных флуорофоров определяется алгоритмом локализации с точностью до 20 нм.
4. Все локализации, найденные в стэке обычно из десяти тысяч изображений, отображаются в одном реконструированном изображении со сверхвысоким разрешением.

Чтобы гарантировать максимально возможную гибкость, nanoFLeyeTM установлен на высококачественном «мягком» столе со встроенным ПК, который можно перемещать и транспортировать без дополнительной регулировки. Он состоит из вертикальной установки, в которой образец загружается сверху. Использование специальных масляных иммерсионных объективов (60X/NA=1.49) позволяет использовать TIRF-микроскопию (флуоресценция с полным внутренним отражением) в дополнение к обычному широкопольному изображению, а встроенный предметный XY-столик для стандартных предметных стекол (76×26 мм) и 96-луночных планшетов (127.7×85.4 мм) позволяет использовать инкубаторы живых клеток.

На изображениях показаны клетки Cos-7, зарегистрированные с помощью стандартной широкопольной флуоресцентной микроскопии. Различные монохромные изображения (длина волны слева направо: 405 нм, 488 нм, 561 нм, 647 нм) были последовательно записаны с помощью ReconFlexTM 1920. Клетки были окрашены DAPI для ядра (синий), Alexa Fluor 488 для митохондрий (голубой), TMR для микротрубочки (зеленые) и SiR для актина (красные). На нижнем рисунке показаны четыре объединенных канала

Различные изображения образцов упомянутых клеток Cos-7

На изображениях показан сегмент флуоресцентно-меченых микротрубочек в культуре клеток (HeLa-клетки): Слева — обычное эпифлуоресцентное изображение с масштабной линейкой 1 мкм для сравнения; Справа находится изображение образца в идентичном положении при сверхвысоком разрешении, на котором алгоритм сверхвысокого разрешения, содержащийся в камере ReconFlexTM 1920 (S), показывает подструктуры.