Разарретирование

Разарретирование клетки означает активацию молекул с биохимической маскировкой посредством фотолиза, который имитирует физиологическое высвобождение биологически активных соединений. Этот метод широко используется в нейробиологии, где биологически активной молекулой обычно является глутамат или другой нейротрансмиттер. Используя двухфотонную фотостимуляцию с ультрабыстрым импульсным инфракрасным лазерным излучением, может быть достигнуто очень точное выделение таких соединений в очень малых объемах. Двухфотонная визуализация позволяет прослеживать изменения в дендритах или шипиках, а также исследовать распределение рецепторов на нейронах.

Разарретирование клетки в четко определенных точках

Модификация FEMTOSmart Galvo с объединенным оптическим путем

Точность положения точки возбуждения и очень гибкие режимы сканирования означают, что микроскоп FEMTOSmart Galvo – это лучший выбор для экспериментов разарретирования клетки. Многоточечное сканирование (см. желтые точки на рисунке ниже) используется для стимуляции вокруг шипиков, в то время как многострочное сканирование (см. стрелки на рисунке ниже) делает возможным высокоскоростное сканирование вдоль дендритов. Вторичный лазерный луч (см. опцию объединенный оптический путь), необходимый для стимуляции, распространяется по существующему оптическому пути. Таким образом, стимуляция и визуализация могут быть выполнены почти одновременно с использованием гальваносканера. Время переключения в доли микросекунд между стимуляцией и визуализацией достигается с помощью ячейки Поккельса.

Разарретирование клетки с помощью DNI-GLU, выполненное на микроскопе FEMTOSmart Galvo.

Специализированные функции ПО для картирования фотостимуляции

Управляющее программное обеспечение MESc позволяет проводить эксперименты по картированию фотостимуляции в различных областях различной формы. Области могут быть выбраны вручную: одна за другой, вдоль линии, в кадре. Также могут быть выбраны различные модели стимуляции, такие как точка, спираль, крестообразное, зигзаг. Данный метод анализа быстро формирует наборы данных, оценивая изображения флуоресцентных изменений через определенные промежутки времени. Инструмент анализа для картирования стимуляции может создавать многоканальные карты, сформированные из откликов после эксперимента.

Соединения для разарретирования

Химический реагент DNI-GLU-TFA

Данный реагент представляет собой динитро-индолиновую маску формы глутамата, который высвобождает биологически активный глутамат быстрее, чем любое другое коммерчески доступное соединение. Он был разработан для получения высокого квантового выхода, требующего меньшего облучения для высвобождения, поэтому его эффективная концентрация ниже, чем у других арретирующих скаффолдов.