Конфокальная флуоресцентная микроскопия

Флуоресцентная микроскопия представляет собой метод анализа различных биологических объектов за счет их способности излучать при облучении светом. Данное явление называется флуоресценцией, т.е. молекулы биологических образцов способны поглощать кванты возбуждающего излучения и переходить в электронно-возбужденное состояние (верхние энергетические уровни), а затем снова возвращаться в основное состояние (нижний энергетический уровень).

Но в данной ситуации есть два важных аспекта, которые негативно влияют на результаты измерений:

• Во-первых, биологический материал, как правило, сам по себе флуоресцирует крайне слабо
• Во-вторых, при использовании обычных оптических флуоресцентных микроскопов при исследовании достаточно «толстых» образцов помимо излучения от точки, находящейся в фокусе, приемник/оптическая система будет регистрировать и фоновое излучение от областей, находящихся вне фокальной плоскости объектива

Данная проблема дала толчок развитию конфокальной флуоресцентной микроскопии и использованию специальных вспомогательных веществ (флюорофоры), отличающихся сильной флуоресценцией при облучении их светом. Таким образом, появилась возможность отсекать фоновое излучение с помощью специальных диафрагм (пинхол), используемых в конфокальных микроскопах и получать специфически контрастную окраску и делать снимки с высоким разрешением многих внутриклеточных белковых структур.

Таким образом, использование конфокального флуоресцентного микроскопа вместо обычного, а также большой выбор флюорофоров, позволяют получать четкие изображения различных биологических структур в разных плоскостях сканирования. Это открывает новые возможности для ученых и исследователей биологической, медицинской и подобных областей.

Стоит также отметить, что на сегодняшний день важной потребностью в данной области является исследование не только одного, а сразу нескольких биологических материалов с разными флуорофорами. Наш лазерный сканирующий конфокальный флуоресцентный микроскоп K1-Fluo предоставляет Вам такую возможность. В конфигурацию данного микроскопа может быть включено до 4 возбуждающих лазера (доступен широкий выбор длин волн для облучения необходимых флюорофоров), а излучение флуоресценции от каждого образца фокусируется отдельным детектором, что увеличивает общую производительность.

Дополнительно наш флуоресцентный микроскоп может быть интегрирован в любой из доступных коммерческих микроскопов (Zeiss, Nikon, Olympus, Leica), либо поставляться совместно с DMB-стойкой, если Вам необходимо компактное решение для конфокальной флуоресцентной микроскопии.

В данном микроскопе, как и в обычном конфокальном микроскопе NS-3500, также реализована технология использования пьезоэлектрических приводов для перемещения сканирующей головки в диапазоне 400 мкм с шагом в 0.1 нм в режиме точного сканирования, что позволяет получать изображения биологических образцов с еще более высоким разрешением и контрастом, чем у других аналогов. Эта особенность позволяет анализировать и получать трехмерные изображения мельчайших структур.

Другим важным аспектом для флуоресцентной микроскопии является необходимость наличия инструмента для управления сложной системой и анализа полученной информации. Наше простое и интуитивное программное обеспечение позволяет с легкостью анализировать управлять всеми компонентами микроскопа (лазеры, сканеры, детекторы, предметный столик) независимо.

Также оно предоставляет Вам возможность анализировать большие образцы за счет сканирования малых областей и их последующего сшивания; исследовать более мелкие области, представляющие наибольший интерес; проводить анализ отельных участков вдоль любых направлений в горизонтальной плоскости; получать трехмерные изображения биологических структур и т.д.

Дополнительная система автофокусировки и наличие ПЗС-камеры еще больше упрощают процедуру измерения и позволяют Вам полностью сосредоточиться на исследовании, не отвлекаясь на второстепенные действия, а широкий выбор аксессуаров позволить охватить более широкие области исследований.

В отличие от разрушающей флуоресценции, с помощью CLSM микроскопа можно изучать структуру клеток и их органелл, например, цитоскелета, лизосом, митохондрий, ядра, хромосом и даже генов.

Еще одна задача – это исследование динамических процессов, происходящих в живых клетках. Например, клеточного транспорта биологически-активных соединений, изменений концентрации и распределения ионов кальция. Записав в памяти компьютера серию оптических срезов, можно провести объемную реконструкцию объекта и получить его трехмерное изображение, не используя трудоемкую методику изготовления и фотографирования серийных гистологических срезов.

CLSM также находит применение в обнаружении рака кожи и наблюдении подкожных тканей. Недавно была представлена система конфокального эндоскопа для субмикронных желудочно-кишечных исследований.